病毒培养在细胞瓶里。细胞长满瓶底。细胞贴壁生长。细胞状态良好。细胞形态正常。显微镜观察细胞。细胞密度合适。进行攻毒实验。

实验需要病毒液。病毒液从冰箱取出。病毒液放在冰上融化。病毒液避免反复冻融。实验需要无菌操作。超净工作台提前打开。紫外线照射三十分钟。实验台面用酒精擦拭。实验人员穿好白大褂。实验人员戴好口罩。实验人员戴好手套。手套喷上酒精消毒。

细胞培养液倒掉。细胞用PBS清洗。PBS轻轻加入瓶内。PBS覆盖细胞表面。轻轻摇晃细胞瓶。PBS倒掉。重复清洗两次。清洗去除血清。血清影响病毒吸附。

病毒液用培养液稀释。稀释多个不同浓度。浓度梯度很重要。浓度太高细胞死亡快。浓度太低没有效果。找到合适浓度很关键。取一个无菌离心管。加入一定量培养液。加入一定量病毒原液。用移液器轻轻吹打。吹打保证混合均匀。这是第一个稀释度。从这个管子吸取液体。液体加入下一个管子。下一个管子有培养液。依次进行系列稀释。稀释倍数十倍递增。病毒滴度提前测定。这次实验使用已知滴度。

稀释好的病毒液加入细胞瓶。每个浓度做三个瓶子。三个瓶子取平均值。减少实验偶然误差。另设两个对照组。对照组不加病毒液。对照组只加培养液。细胞瓶做好标记。标记使用油性笔。标记注明病毒浓度。标记注明实验日期。标记注明操作人员。细胞瓶放入培养箱。培养箱温度三十七度。培养箱二氧化碳浓度百分之五。病毒吸附细胞表面。吸附时间一小时。期间轻轻摇晃瓶子。摇晃让液体均匀。保证每颗细胞接触病毒。

一小时后吸出病毒液。病毒液含有未吸附病毒。病毒液倒入消毒液。消毒液杀死病毒。细胞再次加入PBS。PBS清洗细胞表面。清洗去除残留病毒。清洗进行两次。清洗完毕加入新培养液。培养液含有血清。血清维持细胞生长。培养液含有抗生素。抗生素防止细菌污染。细胞瓶放回培养箱。培养箱保持恒定环境。

每天观察细胞变化。每天记录细胞情况。显微镜观察细胞形态。正常细胞形态规则。细胞边缘清晰光滑。感染细胞可能变圆。感染细胞可能脱落。感染细胞可能聚团。细胞病变逐渐出现。第一天可能无变化。第二天部分细胞变圆。第三天细胞脱落增多。第四天细胞大片死亡。细胞病变记录分数。细胞无病变记零分。百分之二十五病变记一分。百分之五十病变记二分。百分之七十五病变记三分。百分之百病变记四分。记录每个瓶子分数。计算平均病变分数。

除了肉眼观察细胞。还有检测病毒基因。收集细胞上清液。上清液可能含病毒颗粒。提取病毒核酸。使用核酸提取试剂盒。操作按照说明书。加入裂解液。加入结合液。混合溶液转移柱子。柱子放入离心机。离心让核酸吸附。加入洗涤液洗涤。洗涤去除杂质。最后加入洗脱液。洗脱液溶解核酸。得到病毒RNA。

RNA进行反转录。反转录得到cDNA。cDNA进行PCR扩增。PCR仪器设定程序。变性温度九十四度。退火温度五十多度。延伸温度七十二度。循环进行三十多次。PCR产物进行电泳。电泳胶加入核酸染料。染料在紫外灯下发亮。观察条带亮度。条带亮度反映病毒量。亮度越高病毒越多。对比不同浓度组。对比不同时间点。数据记录在表格。

还有检测病毒蛋白。细胞裂解提取蛋白。蛋白浓度进行测定。测定使用标准方法。蛋白样品加入上样孔。进行电泳分离。蛋白按分子量分开。蛋白转到膜上。膜加入封闭液。封闭液防止非特异结合。膜加入一抗。一抗识别病毒蛋白。膜洗涤去除多余一抗。膜加入二抗。二抗带有标记。标记可能是酶。标记可能是荧光。加入底物显色。显色结果拍照。分析条带深浅。

实验数据需要统计。数据输入电脑软件。计算平均值和标准差。进行差异比较。病毒组和对照组比较。不同浓度组互相比较。不同时间点互相比较。统计方法常用t检验。P值小于零点零五有意义。P值小于零点零一更有意义。结果用图表表示。图表直观清晰。柱状图显示病毒滴度。折线图显示病变进程。

实验过程遇到问题。细胞污染细菌。细菌生长很快。培养液变浑浊。细胞全部死亡。实验必须重新开始。加强无菌操作。试剂检查是否污染。培养箱定期清洁。

病毒稀释计算错误。浓度不符合预期。细胞病变没有梯度。重新计算稀释步骤。每一步仔细核对。移液器定期校准。

细胞状态本身不好。细胞传代次数过多。细胞生长缓慢。攻毒结果不可靠。使用新鲜培养的细胞。细胞代数保持早期。保证实验基础可靠。

实验重复三次。三次结果趋势一致。数据才可信。单次实验有偶然性。重复实验减少误差。

攻毒实验验证病毒毒性。攻毒实验评估药物效果。加入药物处理细胞。再看病毒病变情况。病变减轻说明药物有效。病变不变说明药物无效。实验为抗病毒研究提供依据。

实验动物也做攻毒。小鼠分为不同组。一组注射病毒。一组注射生理盐水。注射剂量经过计算。注射途径可能鼻腔。注射途径可能腹腔。观察小鼠表现。记录小鼠体重。记录小鼠活动。记录小鼠进食。严重时解剖小鼠。取肺部组织。组织固定切片。染色看病理变化。比较组间差异。

这些实验存在伦理。动物实验遵循原则。减少动物使用数量。优化实验减少痛苦。实验人员经过培训。实验方案通过审批。细胞实验相对简单。动物实验更加复杂。

实验结束处理物品。细胞瓶放入消毒液。病毒废物高压灭菌。实验台面彻底消毒。数据及时整理分析。记录本详细书写。拍照结果备份存储。讨论实验结果含义。分析可能的原因。设想下一步实验。科学问题逐步深入。实验技术不断练习。操作越来越熟练。结果越来越稳定。

这就是攻毒实验的过程。一步一步进行操作。一次一次进行观察。一点一点进行记录。最后得到实验数据。数据回答科学问题。研究病毒和细胞关系。研究病毒和机体关系。研究如何对抗病毒。研究如何保护健康。实验是研究的基础。认真对待每个步骤。严格遵循操作规范。科学发现来自实践。